原理:
甲基化特異性的PCR是一種靈敏度高且操作相對簡單的甲基化研究方法。重亞硫酸鹽處理DNA后,基因組DNA發生的由甲基化狀態決定的序列改變。隨后進行引物特異性的PCR。該方法引物設計是關鍵。MSP中設計兩對引物,即一對結合處理后的甲基化DNA鏈(引物對M),另一對結合處理后的非甲基化DNA鏈(引物對U)。檢測MSP擴增產物,如果用引物M能擴增出片段,則說明檢測位點存在甲基化;若用引物U擴增出片段,則說明被檢測的位點不存在甲基化。
該方法優點是:檢測靈敏度高,樣品消耗少,僅需1μg的基因組DNA,可用于石蠟包埋樣本;快速、簡單,省時。
MSP流程示意圖
用亞硫酸鹽處理后DNA分子發生了由甲基化狀態決定的序列改變。用甲基化特異性的引物(primer M)和非甲基化特異性的引物(primer U)進行擴增。只有結合完全的甲基化或非甲基化特異性引物的片段才能得到擴增。
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