樣品量與制備流程:
1、組織離開活體后請盡快進行操作(不超過30分鐘),準備 20 mg-100mg 的組織即可,組織塊過大易拉長操作與保存液滲透時間,可能導致組織塊中的
RNA 降解 (degradation);
2、液態氮保存法:準備 20-100 mg 的組織塊,大小約 0.5 cm x 0.5 cm x 0.5
cm,先置于液態氮中快速冷凍,再將樣品放入專門存放液態氮的冷凍小管中 (請使用抗凍冷凍小管),保存于液態氮筒中;
3、Trizol reagent (Invitrogen # 15596-018)
保存法:Trizol試劑可抑制RNA酶活性,破壞細胞膜結構以裂解細胞釋放出RNA。取新鮮組織(注:生物體死亡后1分鐘內取材料并保存好),組織塊以PBS或生理鹽水清洗干凈,每50-100
mg組織加1 ml Trizol溶液勻漿裂解組織樣品,操作最好在冰上進行。勻漿的裂解液可于- 80℃長期保存;
4、 RNAlater保存法:請參照RNAlater 說明書進行操作,注意 使用 RNAlater 時,加入組織大小5-10倍體積的 RNAlater
溶液,以 RNase free 的剪刀將組織剪成小塊使 RNAlater 溶液能夠完全浸透,先置于4度冰箱過夜或至少3小時,再轉移 -20 或 -80
度保存,請勿直接置冰箱凍存。
寄送注意事項:
1、自液氮或 -80°C (Trizol 或 RNAlater 保存) 取出樣品,確認各個離心管/ EP 管或冷凍管蓋密合度佳,且以parafilm
封口膜纏繞包裝蓋口;
2、以小盒、封口袋或 50 mL
離心管包裝樣品,置于塑料袋中。樣品說明單請以封口袋或塑料帶保護以免濕氣毀損文件。將樣品與文件置入盒內,以密閉性較佳或厚度較厚的泡沫盒,加入干冰搭配冰袋運送
(一天所需的干冰量約 3公斤)。以寬膠帶纏繞密封泡沫盒即可寄出;
3、RNAlater裂解樣本的運送以能保證樣品維持在4度以下為原則,液氮或Trizol 保存的樣本需要全程以干冰運送。
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