數字PCR_服務_上海卓灝醫藥科技有限公司
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數字PCR


技術原理:
數字PCR( 也可稱單分子PCR) 一般包括兩部分內容,即PCR 擴增和熒光信號分析。在PCR 擴增階段,與傳統技術不同,數字PCR 一般需要將樣品稀釋到單分子水平,并平均分配到幾十至幾萬個單元中進行反應。不同于qPCR 對每個循環進行實時熒光測定的方法,數字PCR 技術是在擴增結束后對每個反應單元的熒光信號進行采集。最后通過直接計數或泊松分布公式計算得到樣品的原始濃度或含量。數字PCR 的定量方法不依賴于擴增曲線的循環閾值,因此不受擴增效率的影響,也不必采用看家基因和標準曲線,具有很好的準確度和重現性,可以實現絕對定量分析。在未來十年內,醫學保健的目標是提供優質高效的個性化醫療。PCR 方法會在實現這個目標的過程中發揮重要作用。相比于傳統的PCR,數字PCR 技術有著無可比擬的優勢和廣泛的應用前景。

  


數字PCR檢測原理


  數字PCR檢測流程


應用領域:
  ·突變/稀有變異檢測(Mutation/Rare variant detection)
  ·拷貝數變異(Copy-number variation)
  ·進入外周循環(包括血液和糞便)的腫瘤組織核酸分析
  ·無創產前篩查
  ·轉化移植檢測
  ·藥理學(Pharmacogenetics)
  ·基因表達分析(Gene expression analysis)-特別針對單細胞或少量細胞或者血清血漿樣品
  ·線粒體拷貝數分析與線粒體突變分析
  ·數字PCR可以驗證二代測序(NGS)
應用案例:

  ·Huggett JF, Foy CA, Benes V et al.(2013) The digital MIQE guidelines: minimum information for publication of      quantitative digital PCR experiments. Clinical Chem 6:892–902.
  ·Absolute quantification by droplet digital PCRversus analog real-time PCR Christopher M Hindson et al. nature  methods | VOL.10 NO.10 | OCTOBER 2013.
  ·Detection of Cancer DNA in Plasma of Early Stage Breast Cancer Patients Julia A. Beaver*1, Danijela Jelovac  February 19, 2014 American Association for Cancer Research.
  ·Evaluation of a Droplet Digital Polymerase Chain Reaction Format for DNA Copy Number Quantification Leonardo B.  Pinheiro, Victoria A. Coleman,November 28, 2011 American Chemical.
  ·Qin J, Jones R C, Ramakrishnan R. Studying copy number variations using a nanofluidic platform. Nucleic Acids Res,  2008,36(18): e116.
  ·Lo Y M D, Fiona M F, Chan K C A, et al. Digital PCR for the molecular detection of fetal chromosomal aneuploidy.  Proc Natl Acad Sci USA, 2007, 104(32): 13116-13121.
  ·Warren L, David B, Irving L W, et al. Transcription factor profiling in individual hematopoietic progenitors by digital  RT-PCR. Proc Natl Acad Sci USA, 2006, 103(47): 17807-17812.
  ·Ottesen E A, Jong W H, Stephen R Q, et al. Microfluidic digital PCR enables multigene analysis of individual  environmental bacteria. Science, 2006, 314(5804): 1464-1467.
  ·Tadmor A D, Elizabeth A O, Jared R L, et al. Probing individual environmental bacteria for viruses by using  microfluidic digital PCR. Science, 2011, 333(6038): 58-62.
  ·Tian Wang, Hongying Sha. , et al. Polar Body Genome Transfer for Preventing the Transmission of Inherited  Mitochondrial Diseases。Cell 157, 1591–1604, June 19, 2014.


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